廖远泉  王后伟  李  俊  王玲玲
安徽省泾县医院

    酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清抗结核分枝杆菌抗体，为Nassau等（1976）率先应用于结核病的临床诊断。近年来，随着结核分枝杆菌几种特异性抗原的发现与纯化，实验技术的不断改进，ELISA检测血清结核抗体已在国内临床实验应用，并有多篇文献研究探讨了结核抗体的检测及其临床意义。研究证实活动性结核病患者细胞免疫减损，体液免疫亢进，血液及其它体液中结核抗体（主要是IgG）升高，应用ELISA检测结核抗体有助于结核病的诊断和鉴别诊断。我们采用高纯度结核分支杆菌纯蛋白衍生物作抗原包被的酶标硬条，应用ELISA检测了116例临床诊断为肺结核的患者，和112例非结核病患者及健康体检正常者血清抗结核抗体，现将实验结果报告如下。
    1  对象与方法
    1.1   对象
    1.1.1  肺结核组1999-2000年度本院住院/门诊临床诊断为肺结核的患者116例，男性71例，女性45例，年龄16～73岁，平均41.3岁。（其中分痰菌阳性组55例，痰菌阴性组61例）。肺结核诊断标准参考陈灏珠，主编《内科学》（第4版），北京：人民卫生出版社，1996：81,根据痰结核分支杆菌检查，X线检查以及临床症状和体征诊断。
    1.1.2  实验对照组：为本院临床确诊的支气管炎患者（8例），肺炎（7例），肺癌（3例），肝炎（12例），胆囊炎/胆管炎/胆结石（11例），及其它细菌感染（11例）等非结核病患者52例；和门诊无结核病史的健康体检者60例。合计112例。
    1.1.3  TB-Ab阳性  治疗6个月后复检血清结核抗体患者31例。检测对象血清标本均由本院临床和细菌室提供，晨空腹血标本，及时检测。
    1.2 方法
    1.2.1  血清抗结核抗体（IgG）检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA），快速测定试剂盒由伊利康生物技术有限公司提供，参考说明书方法操作。显色后应用DG-3022A型酶标仪检测。
    1.2.2  痰厚涂片抗酸杆菌染色应用萋尔 纳尔逊染色法，以连续2次每个100个视野内发现抗酸杆菌3～9条为痰涂片阳性。
    1.2.3  计算ELISA检测血清结核抗体（IgG）对临床诊断肺结核的试验敏感性，特异性，准确性，诊断指数，阳性预期值，阴性预期值，以及治疗后的抗体阴转率。
    1.2.4  统计学方法：采用校正卡方检验比较各组间率的差异。
    2  实验结果
    2.1  血清抗结核分支杆菌抗体（IgG）检测结果见附表

       附表：血清抗结核分支杆菌抗体（IgG）检测结

       注：X2检验的P值均为实验对照组（健康人和非结核病人）的比较结果。

    2.2  ELISA法检测116例肺结核患者和非结核患者及健康体检者血清结核抗体（IgG）,经计算该试验临床诊断肺结核病的敏感性为61.20%，特异性为95.53%，准确性为78.07%，诊断指数为156.73%，阳性预期值为93.42%，阴性预期值为70.39%。
    2.3  痰菌阳性组与痰菌阴性组二者血清结核抗体（IgG）阳性率比较X2=32.05  P<0.005。
    2.4  抗结核6个月后复检的病例31人，血清结核抗体阳性者7人，阳性率22.59%;与现症肺结核病人组血清结核抗体阳性率比较，X2=16.25  P<0.005；转阴者24人，阴转率为77.41%。
    3  讨论
    3.1  “在结核病传统实验室诊断方法中，抗酸染色镜检阳性率仅30%左右；结核菌素试验阳性率约为75%，但有假阳性问题：培养结果虽可靠，但需时3～8周”。因此多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。PCR技术虽具有快速、敏感、微量等优点，但临床实际应用因为很多因素的影响而致敏感性，特异性上有很大差异，基层医院和结防单位目前还不能作为临床常规应用。
    我们应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测临床诊断为肺结核患者血清抗结核分枝杆菌抗体，临床诊断试验的敏感性为61.20%，特异性达95.53%，准确性为78.07%，诊断指数为156.73%，阳性预期值为93.42%,阴性预期值70.39%；与鲁启超等（1998）应用脂阿拉伯酸甘露糖（LAM）作为抗原的ELISA方法的检测结果相近，具有较高的实验特异性和阳性预期值，可能与本文应用的高纯度结核分枝杆菌纯蛋白衍生物作为包被抗原有关。陆学东等（1998）对13种分枝杆菌菌株抗原成份分析及应用的研究表明：结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌菌体多肽成份SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）电泳区带图谱和抗原免疫原性基本上一致，说明结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌抗原具有相似的结构，其中免疫原性比较强的抗原成份主要有分子量为76000、65000、34000～40000、28000、25000多肽等，通过与其它分枝杆菌多肽抗原比较，证明分子量为34000～38000和28000多肽只与少数分枝杆菌有交叉免疫反应，是较特异的多肽抗原成份，并已证明是与结核特异性诊断相关的抗原成份。实验结果表明该实验方法基本达到了快速（40min）、敏感、特异，简便（亦可目测判断实验结果）的实验要求。
    3.2  痰菌阳性是肺结核活动进展期的重要指标之一，本文痰菌阳性组与痰菌阴性组二者血清结核抗体（IgG）阳性率比较：X2=32.05,P<0.005;差异具有非常显著意义。这与“结核杆菌菌体抗原能刺激B淋巴细胞分化增殖成浆细胞，并由浆细胞分泌特异性抗体。Nassau用酶联免疫吸附试验证明活动性或某些类型的结核病人体内出现一定量的抗体；其中特异性抗体（IgG）与对照组比较有显著差异”的论述相符。检测结果表明，ELISA检测血清抗结核抗体（IgG）对活动性肺结核尤其进展期患者的诊断，以及与肺癌、肺部炎症等的鉴别诊断具有重要意义。（X2=分别为116.89;147.57;P均<0.005）。
    3.3  痰涂片阴性结核病一般应包括涂阴，培阴和涂阴培阳二部分，“由于结核病诊断缺乏‘金标准’”，确诊只有通过临床标本培养出结核分枝杆菌或正规抗结核治疗有效来确定，因而往往无法早期明确诊断。本文痰菌阴性组，结核抗体阳性率为36.06%(22/61)，与非结核病人，健康体检正常者结核抗体阳性率4.46%(5/112)比较X2=27.59;P<0.05,其差异亦具有非常显著意义。提示通过结核抗体检测可以减少痰涂片阴性患者的漏诊及误诊，具有一定的早期，辅助诊断价值。对肺外结核也具有辅助诊断意义（另文报告）。
    3.4  Kalish曾指出，随着抗结核治疗时间的延长，血清抗结核分枝杆菌抗体（IgG）水平逐渐降低；鲁启超等的研究也表明结核抗体水平可用来评估结核病的转归。我们对31例肺结核患者抗结核治疗6个月后，复检血清结核抗体的阳性率为22.59%（7/31）,与现症肺结核患者组阳性率比较，X2=16.25;P<0.005；血清抗结核抗体阴转率为77.41%（24/31）。我们的实验亦证实结核抗体水平与结核病情密切相关，对评价肺结核患者的疗效有较高的实用价值。

本文关键字：结核诊断,ELISA,酶联免疫吸附试验,结核抗体